厭氧培養(yǎng)箱是用于培養(yǎng)厭氧微生物的關(guān)鍵設(shè)備，通過創(chuàng)造無氧環(huán)境滿足厭氧菌的生長需求。以下是詳細的操作指導及注意事項：

一、操作前準備
1. 環(huán)境檢查
  確保培養(yǎng)箱放置平穩(wěn)，周圍無強電磁干擾，通風良好。
  檢查電源、氣源（如氮氣、氫氣、二氧化碳混合氣）連接是否正常。
2. 氣密性檢測
  關(guān)閉所有閥門，啟動真空泵抽真空至 0.08 MPa，關(guān)閉閥門并觀察壓力表，5分鐘內(nèi)壓力變化應(yīng)≤0.01 MPa。
3. 耗材準備
  預還原培養(yǎng)基（如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基）、厭氧指示劑（如美藍或刃天青）、無菌手套、培養(yǎng)皿等。

二、操作步驟
1. 系統(tǒng)啟動
  打開電源，啟動控制面板，設(shè)置溫度（通常35 37℃）和氣體參數(shù)（如85% N?、10% H?、5% CO?）。
2. 置換箱內(nèi)氣體
  抽氣 充氣循環(huán)：
1. 抽真空至 0.08 MPa。
2. 充入混合氣體至常壓，重復3 5次（確保O?濃度<1%）。
  持續(xù)沖洗法：以10 15 L/min流速通入混合氣30分鐘。
3. 厭氧環(huán)境驗證
  放置厭氧指示劑于箱內(nèi)，30分鐘后應(yīng)無色（若為美藍，藍色表示有氧）。
4. 樣品轉(zhuǎn)移與培養(yǎng)
  傳遞艙操作：
1. 外門放入樣品后關(guān)閉，抽真空并充氣（重復2 3次）。
2. 通過內(nèi)門將樣品移入主箱體。
  培養(yǎng)時間根據(jù)菌種調(diào)整（如脆弱擬桿菌需48小時）。

三、使用后處理
1. 清潔消毒
  用75%乙醇或?qū)Ｓ孟緞┎潦脙?nèi)壁、手套袖套。
  傳遞艙每次使用后需消毒。
2. 氣體與電源管理
  關(guān)閉氣瓶閥門，排空管路余氣。
  長期不用時每周開機1次維持干燥。

四、注意事項
1. 安全警示
  氫氣易燃，操作時嚴禁明火，確保防爆設(shè)施完好。
  箱內(nèi)壓力禁止超過0.02 MPa。
2. 故障處理
  漏氣：檢查門封、袖套是否破損，用肥皂水檢測漏點。
  溫度異常：校準傳感器或檢查加熱元件。
3. 質(zhì)量控制
  每周用化學指示劑驗證厭氧條件。
  定期更換催化劑（如鈀粒，每3 6個月或活性下降時）。

五、常見問題解答
  Q：培養(yǎng)箱無法維持厭氧狀態(tài)？
A：檢查氣瓶壓力、催化劑活性及系統(tǒng)密封性。
  Q：傳遞艙門打不開？
A：確認內(nèi)外門壓力平衡，避免強行開啟。